Вы хотите получить полезный белок в клетках бактерий, и для этого вы вставили ген этого белка в плазмиду. Полученные плазмиды вы ввели в клетки

бактерий. При этом часть клеток не получили плазмиду вовсе, часть получили плазмиду без вставки, часть получили плазмиду со вставкой. Вы выделили плазмидную ДНК из всех бактериальных колоний, полученных вами, и обработали ее рестриктазой (ферментом, который разрезает ДНК в участках с определенной последовательностью нуклеотидов — сайтах рестрикции). Ниже приведена карта плазмиды, которую вы ожидаете получить, с указанием сайтов рестрикции. Вставка гена в плазмиду осуществлялась по сайтам рестриктазы HindIII, а рестрикция выделенных вами фрагментов из клонов для анализа — рестриктазой KpnI. Цифрами обозначено расстояние в парах нуклеотидов от нулевой точки. Обратите внимание, что вставка могла произойти как в прямой ориентации — тогда ваш ген будет работать, так и в обратной ориентации — и тогда ваш ген работать не будет. 1) Карта плазмиды со вставкой в прямой ориентации

  • Теперь вам нужно разобраться, какие бактериальные колонии несут нужную вам плазмиду со вставкой в правильной (прямой) ориентации.

    Для этого установите соответствие между дорожками в геле, обозначенными номерами, и тем, что было на них нанесено. М — маркер длин фрагментов ДНК, с которым нужно сравнивать полосы для определения длины фрагментов.

    Обратите внимание, что исходная плазмида, не обработанная рестриктазой, неоднородна: в основном это суперскрученная форма, которая движется в геле быстрее, чем линейная ДНК той же длины, однако с примесью линейной формы и не суперскрученной кольцевой формы, которая движется медленнее линейной.

Вопрос задан анонимно
02.04.16
0 ответов
Ответов пока нет
Рекомендуем личную консультацию

Елена Игоревна Колесникова

Сейчас на сайте
Консультации по Соционике, Типирование. Зачем ЭТО нужно читайте ниже. Также консультации по Медицине.
Посмотреть всех экспертов из раздела Учеба и наука > Биология